血培养瓶中肺炎链球菌的自溶和特征

主要作者单位：

医院（蔡婷婷）

医院（屈平华）

从无菌体液中直接培养到肺炎链球菌，是确切诊断侵袭性肺炎链球菌病的金标准方法。但是，由于自溶酶在液体环境中可快速扩散，可导致血培养系统中的肺炎链球菌在报阳后快速死亡。本文简要介绍自动化血培养系统中肺炎链球菌的自溶和特征，为进一步规范血培养检验程序提供依据。

一、血培养系统肺炎链球菌的自溶

制备到cfu/ml不同初始浓度的肺炎链球菌ATCC菌悬液1ml直接注入血培养瓶中，结果肺炎链球菌在6-12小时内报阳，通过菌落计数发现，报阳后终浓度基本相当，为cfu/ml菌量。

尽管不同菌株自溶后死亡的时间不同，但以报阳时间为节点，肺炎链球菌最快8h内全部自溶。并且，受自溶酶影响，肺炎链球菌的细胞壁遭到破坏，革兰染色出现阴染，甚至细胞壁完全破碎，几乎看不到菌体（见图1）

图1、不时同间阶段肺炎链球菌的自溶和革兰染色情况

二、厌氧血培养瓶中肺炎链球菌不自溶

肺炎链球菌是一种兼性厌氧菌，但事实上，肺炎链球菌在厌氧环境中，菌落的生长情况比需氧条件要好。并且，同一菌株，在需氧条件下可能出现“肚脐眼”样菌株，但在厌氧条件下，却由于不产生自溶酶，不出现典型的“肚脐眼”样自溶菌落。对于该特征，各位老师有兴趣的话，可以试一下。总之，我们的试验结果是，在厌氧瓶中，肺炎链球菌报阳后，5天仍然不自溶（表1）。

表19株不同来源菌株在厌氧培养瓶中自溶死亡时间

菌株

需氧瓶

（h）

厌氧菌

(h)

1

62

2

8

3

10

4

9

5

13

6

12

7

29

8

9

9

8

三、自溶后肺炎链球菌该如何鉴定

自溶后的肺炎链球菌，可以采用乳胶凝集法和胶体金免疫层析法检验菌体抗原（图2），或采用PCR的方法进行检测其核酸（图3）。

图2、直接胶体金检测

图3、PCR和测序检测

四、讨论

肺炎链球菌是一种可引起人的急性感染的重要病原菌，尤其对于儿童和老年人而言，肺炎链球菌侵袭性感染是引起其急性死亡的一个风险因素。但在-年间，我们采用PCR和测序的方法，医院送来的10余例血培养瓶中自溶死亡的肺炎链球菌，且其中以单瓶的需氧瓶送检尤为多见。为此，我们通过实验，对自动化血培养系统肺炎链球菌自溶特点进行了分析和总结，初步建立的防范措施如下：①建议临床血培养双瓶检测，以确保肺炎链球菌能在厌氧瓶长时间存活；②建立微生物夜班或相关的预警机制，保证血培养瓶报阳后能及时接种；③对医院，建议建立肺炎链球菌的抗原检测方法，甚至开展尿抗原检测，以辅助性诊断侵袭性肺炎链球菌病。

五、主要参考文献

[1]蔡婷婷,屈平华,穆小萍,等.连续监测血培养系统中肺炎链球菌自溶特点分析[J].临床检验杂志,(12):-.

审核：陈茶

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