猪场发生猪瘟病毒猪细小病毒及葡萄球菌混

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图5　油镜镜检结果（10×倍）

3.2细菌的生化特性鉴定

　　生化特性鉴定结果表明：该细菌可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气；甲基红反应阳性，V-P反应弱阳性；还可分解精氨酸、水解尿素、还原硝酸盐、液化明胶。结合细菌的培养特征判定为葡萄球菌。

3.3PCR/RT-PCR的检测结果

分别对每头病死猪只的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及淋巴结进行取样混合研磨，反复冻融3次，再用匀浆器进行匀浆收集其匀浆液；同时，用0.9%氯化钠溶液稀释肠黏膜及肠内容物，然后r/min离心10min；取上清液，用TaKaRaMinBESTViralDNA/RNAE×tractionKitVer.5.0分别提取总DNA/RNA，分别进行猪圆环病毒2型、猪蓝耳病病毒、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒的PCR/RT－PCR扩增。

反应体系（25μL）：ddH2O8.0μL，2×GCBuffer12.0μL，上、下游引物各0.5μL，DNA/RNA模板3.0μL，Taq酶1.0μL。反应程序：95℃预变性5min；95℃变性30s，51～60℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃再延伸10min。

　　反应结束后取5μLPCR反应结束后产物于1%的1×TAE琼脂糖凝胶中进行电泳检测（90V，45min），用凝胶成像系统观察结果并拍照记录。结果只检测出猪瘟病毒和猪细小病毒特异性阳性条带，测序结果与预期结果相符。未检测出猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪蓝耳病病毒和猪乙型脑炎病毒阳性条带。

4确诊

通过临床症状观察、病理剖检、细菌的分离培养、生化鉴定、病毒的PCR／RT-PCR检测结果，确诊该规模化养殖场猪只为猪瘟病毒、猪细小病毒及葡萄球菌混合感染。

5防治

针对发病情况和诊断结果，首先对发病猪只进行隔离饲养，建议该猪场对健康猪群进行紧急免疫猪细小病毒疫苗和猪瘟疫苗。在使用猪细小病毒灭活疫苗时，采用初产母猪配种前3～4周首次免疫，2周后加强免疫1次，经产母猪每次产前3～4周免疫1次，种公猪每年春秋各免疫1次的免疫程序，常年进行免疫预防注射，以提高种猪免疫抗体水平，使种猪获得坚强的免疫力，从而有效防止该病的发生与传播。

同时加强饲养管理，淘汰发病猪只，对可疑猪只进行隔离饲养，对病死猪只及污染物彻底焚烧或深埋，对污染的圈舍和四周环境进行严格消毒，对新购进猪只进行严格隔离、检疫，隔离期间定期进行抗体监测。葡萄球菌大多为继发感染，发现发病猪只立即淘汰，因此不采取全身治疗。同时，加强环境卫生管理，保持地面整洁，做好圈舍的环境消毒，保障供给充足的清洁饮水，并改善饲养环境，对墙面进行磨光处理，合理规划饲养密度。

责编丨孙迪编辑排版丨王兴波审核丨朱海虹

?来源：《黑龙江畜牧兽医》年第12期（下）第-，页《某猪场CSFV、PPV及葡萄球菌混合感染的诊断》

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