对比手工清洗与自动清洗从手术器械表面清除

翻译：美国鲁沃夫（中国）培训中心翻译组

SíntiadeSouzaEvangelista，理科硕士，巴西米纳斯吉拉斯联邦大学护理学院基础护理系

NataliaRochaGuimaraes，理科硕士，巴西米纳斯吉拉斯联邦大学生物科学研究所微生物学系?

关键词：生物膜，手术器械，清洗，患者安全，医疗器械再处理

生物膜去除是手术器械处理过程中的一个挑战。形成生物膜的微生物有很多，其中就有表皮葡萄球菌，这是一种凝固酶阴性葡萄球菌，是人体皮肤和粘膜的常居菌，医院一种重要的机会性病原体，能够感染特定团体（老年人、免疫受损群体）及部分有留置或植入性医疗器械的患者。

临床上缺少实时确定生物膜结构的方法，因此微生物在手术器械表面初始附着到生物膜形成之间的时间难以知晓，CSSD常用的防止生物膜形成及去除已形成生物膜的清洗方法的有效性也不明确。本研究我们分析了表皮葡萄球菌接触手术器械到形成生物膜所需的时间，以及如何使用手工和自动清洗方法去除生物膜。

方法

实验使用的是新止血钳。用特殊的不锈钢切割刀片将止血钳分为棘齿、手柄和钳端片段（每段约1cm）。选择这三个部位是因为有不规则和光滑表面给清洗过程带来了不同挑战。为保证无菌，这些片段用超声清洗机处理10分钟，用SMS无纺布包装后经过饱和压力蒸汽灭菌，为后续的受控污染做准备。

在II级生物安全柜中将止血钳片段浸没在5mL含CFU/ml表皮葡萄球菌的胰蛋白酶大豆肉汤（TSB）的小瓶中1、2、4、6、8、12小时，温度为37°C，期间放在rpm的定轨振荡器持续混匀。每次培养时间结束后，用移液管去除培养基，用3mL无菌蒸馏水漂洗片段，去除未附着的悬浮菌。用无菌镊子取出片段，分为3组。

1.污染（阳性对照）：检查片段，后续无操作，验证表皮葡萄球菌是否附着及生物膜是否形成。

2.手工清洗：浸入5mL制备好的多酶清洗剂中，再转移到无菌培养皿上，用特殊的柔软毛刷刷5次。

3.自动清洗：将片段放入含5mL多酶清洗剂溶液的无菌小瓶中，放入超声清洗机进行自动清洗，温度40°C，处理10分钟。?

手工清洗和自动清洗后的片段转移到含5mL无菌蒸馏水的小瓶中，摇10秒作为漂洗，而后放在无菌吸水纸上排出多余的水。

污染后及手工/自动清洗后的细胞进行微生物培养。细菌附着及生物膜形成由扫描电子显微镜（SEM）确定。SEM分析中加入2个棘齿片段作为对照，证明纯TSB和多酶清洗剂是否有残留污染。?

结果

浸没不同时间后，各类型片段的微生物负荷均随时间增长（1小时后-CFU/cm2；12小时后CFU/cm2）。手工清洗和自动清洗后微生物负荷分别减少了1-2log10和1-3log10，但是生物膜尚未完全去除。总的来说，手柄的微生物负荷量较低，6小时时差别显著。

SEM为污染后表皮葡萄球菌的附着提供了直接证据。图1A-B为仅接触TSB或多酶清洗剂溶液5分钟的片段。1小时后，附着的表皮葡萄球菌在棘齿区域呈现多层（图1C）。钳口片段浸没2小时后及钳柄片段浸没4小时后观察到EPS形成（图1D-E）。6小时时，钳口片段的表面生长聚集成单层（图1F）。8小时时，棘齿区域的细菌数量及EPS面积增加显著（图1G）。12小时时，钳口片段的EPS厚度增加（图1H）。

图1.手术器械暴露于表皮葡萄球菌不同时间后表面的扫描电子显微镜。

各片段暴露于表皮葡萄球菌后及手工/自动清洗后的平均细菌负荷如图2所示。差异十分显著。手工清洗后细菌负荷减少1-2log10，自动清洗后减少1-3log10。

图2.手工/自动清洗后止血钳片段生长的平均微生物负荷（CFU/cm2）?

讨论

本研究有局限性。微生物附着是时间作用的过程但是也受其他因素的影响，因此我们可以在同一个范围内确定附着过程的不同阶段。此外，受制于SEM的视野，我们无法通过SEM观察到器械的整个表面，因此我们可能会漏掉一些存在的活菌。在当前的研究中，我们只测试了一种微生物。在实际情况下，多数生物膜是由多种细菌形成的。?

结论

细菌接触手术器械后会附着并最终形成生物膜，这是一个复杂的过程。该过程会导致微生物负荷的增加和两小时后胞外聚合物的分泌。从这个意义上讲，在预清洗时采取推荐的方法包括保持器械湿润以及使用后立即将器械送至清洗是很重要的。

相比手工清洗，自动清洗能减少更多的生物负荷，再处理医疗设备时作用更强。然而，手工清洗后发现的细胞以及器械表面发现的生物膜证明了初始附着阶段后，细菌已经牢牢附着在器械表面，两种清洗方法都有缺陷，无法完全去除生物膜。因此，手术器械可能是微生物的贮菌库，特别是有孔洞或沟痕的器械。此外，我们还需处理清洗流程中面临的不同挑战，即使使用一种器械时也要考虑到该器械不同部位的清洗效果。?

--译自AJIC.3

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